Técnico responsable
Mónica Gay Martín bioquimica.lti@uva.es
Tlfs: 983.184678
Campus de Valladolid
Principios de la técnica
SEC-MALS es una técnica absoluta para determinar la masa molar y el tamaño en disolución.
combinando la dispersión de luz multiángulo con la cromatografía de exclusión de tamaño. Es una técnica poderosa para la caracterización absoluta de macromoléculas en términos de: tamaño de masa molar, conformación, relación de conjugación
En SEC-MALS, la columna SEC sirve para separar moléculas por volumen hidrodinámico. El tiempo de retención no se utiliza para determinar el peso molecular. Después de salir de la columna del sistema HPLC o FPLC, las moléculas pasan a través de un detector MALS y son iluminadas por un rayo láser. Las señales MALS, junto con la absorbancia UV y / o las señales de índice de refracción diferencial (dRI), se analizan para cuantificar las propiedades físicas del analito. En el análisis de polímeros, a menudo se agrega un viscosímetro diferencial para medir la viscosidad intrínseca. En el análisis de proteínas y nanopartículas, a menudo se agrega un detector dinámico de dispersión de luz en línea para medir el radio hidrodinámico.
Principales áreas de aplicación de SEC-MALS:
- Biotherapeutics
- Proteínas y Biomacromoleculas
- Polímeros:
El fraccionamiento de campo de flujo (FFF) es un método único para separar macromoléculas y nanopartículas por tamaño. Cambiando los caudales, se puede usar un solo canal de separación para explorar muestras complejas que comprenden moléculas, partículas y emulsiones en todo el rango de tamaños, con una resolución excelente. Empleando el instrumento de dispersión de luz multiángulo (MALS) junto con el índice de refracción y UV / Vis permite analizar: tamaño, masa molar, concentración de masa, concentración de partículas, conformación, composición y carga útil de partículas. En la técnica FFF los analitos no experimentan cizallamiento ni alta presión. Más allá del análisis en línea, las fracciones de tamaño se pueden recopilar para una caracterización adicional fuera de línea.
Debido a que FFF no está limitado por el tamaño de poro como SEC, su límite de tamaño superior para la separación supera el de las columnas de exclusión de tamaño. Las macromoléculas y complejos grandes no se filtran, hay muy poca cizalladura, por lo que se conservan estructuras frágiles. Los efectos de anclaje, comunes en polímeros HMW altamente ramificados, no ocurren en la separación FFF. Además, la potencia de separación, el rango y la resolución se pueden ajustar simplemente ajustando las relaciones de flujo, mientras que una columna no tiene parámetros ajustables. Eso significa que un solo canal FFF puede cubrir el rango donde SEC requeriría múltiples columnas.
- Vacunas, vectores genéticos y vesículas extracelulares
- Nanofármacos Proteínas Biopolímeros y polímeros sintéticos
- Nanopartículas diseñadas y ambientales.
Equipos
Fabricante: Wyatt y Agilent
Marca: Wyatt y Agilent
Modelo: Eclipse (NEON), DAWN (NEON), ViscoStar (NEON), Optilab (NEON), Agilent 1260
Características técnicas:
Bomba isocrática: hasta 600 bar, 0 - 8.820 psi) hasta 5 ml/min y (0 - 200 bar, 0 - 2.950 psi) hasta 10 ml/min
Inyector automático para viales. Capacidad para 132 viales de 2 ml. Loop de inyección de 900 ul. Control de temperatura desde 4 a 40°C.
Compartimento termostatizado de columnas con intervalo de trabajo desde 10º por debajo de la temperatura ambiente hasta 85°C.
Sistema modular para trabajar en FFF asimétrico con un rango de separación aproximado entre 1 nm y 1 mm. Velocidad de flujo cruzado: 0-6,6 ml/min. Permite trabajar con distintas láminas espaciadoras (275μm, 400μm, 525μm) y membranas con tamaños de corte de 5 kD, 10 kD, 30 kD. Límite de presión 30 bares. Permite el trabajo con líquido portador acuoso y orgánico.
Detector ultravioleta/visible (UV) de longitud de onda variable, fotómetro de doble haz y lámpara de deuterio para alta sensibilidad. Rango de longitud de onda: 190 - 600 nm
Detector MALS de 18 ángulos, desde1 kDa y 1 GDa y tamaño entre 10 nm y 500 nm y hasta 1000 nm con modelos específicos de forma.
Detector de viscosidad diferencial de 4 capilares de alta sensibilidad para la determinación directa de la viscosidad intrínseca medida desde 4 hasta 70ºC.
Detector de Índice de refracción (RI) de alta sensibilidad y estabilidad de línea de base. Rango de temperatura de muestra desde 4ºC hasta 50ºC.
Colector de fracciones para análisis y aplicaciones de escala semi-preparativa.
Fabricante: Agilent Technologies, Inc.
Marca: Agilent Technologies, Inc.
Modelo: Infinity II
Servicio Técnico: Agilent Technologies, In
Características técnicas
Sistema de HPLC que cuenta con una bomba cuaternaria con desgasificador integrado, que permita operar en gradientes cuaternarios con flujo programable hasta 5 mL/min y hasta 800 bares de presión. Inyector automático para viales con límite de presión de 800 bar con un sistema de refrigeración de muestras con capacidad de refrigeración de 4 a 40°C. Compartimento termostatizado de columnas con intervalo de termostatización de 4°C hasta 110°C. Detector por Array de Diodos (DAD) con lámpara de volframio y deuterio, con rango de longitudes de onda de 190 hasta 950 nm y capacidad de detección de hasta 8 longitudes de onda simultáneamente a la adquisición de espectros en el rango completo (190-950) de longitud de onda. Detector de Índice de Refracción (RID) con célula de flujo y válvula para la recirculación de disolvente, con control de temperatura entre 5ºC por encima de la temperatura ambiente hasta 55ºC.
